游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒说明书 |
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游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法 注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 规格:50T/48S 产品内容: 提取液:液体 50 mL×1 瓶,室温保存。 试剂一:自备。实验前一天,取一个玻璃瓶,按照正庚烷:无水甲醇:氯仿=24:1:25 的比例配置(自备),盖紧后混匀,室温保存。 试剂二:液体 16 mL×1 瓶,室温保存。 试剂三:粉剂×2 瓶,4℃保存。临用前每瓶加入 32mL 无水乙醇充分溶解,4℃可保存一周。标准品:粉剂×1 支,10mg 棕榈酸,室温保存。临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中,加入 7.8 mL 氯仿充分溶解,即为 5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液。 产品说明: FFA 既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。 FFA 与铜离子结合形成脂肪酸铜盐,并溶于氯仿;利用铜试剂法测定铜离子含量,即可推算出游离脂肪酸含量。 自备仪器和用品: 研钵、冰、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、一个 40mL 玻璃瓶、一个 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿(三氯甲烷)、无水乙醇和蒸馏水。 操作步骤: 一、样品中 FFA 提取: 1、血清中FFA 测定:将所取血液,室温静置 1 h 后,于 4 ℃离心机 3500 rpm 离心 15min,取上层血清置于-20℃冰箱保存,待测。 2、组织中 FFA 含量测定:组织用生理盐水冲洗干净后,用吸水纸吸取表面水分,称取约 0.1g,加入 1.0 mL 提取液,匀浆后,8000rpm,4℃离心 10min,取上清液,待测。 二、测定: 1.分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 550 nm,无水乙醇调零。 2.试剂二在 37℃水浴中预热 30 min 以上。 3.标准品的稀释:将标准品用氯仿稀释成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL。 4.按下表在 1.5mL 离心管中加入相应试剂 对照管测定管空白管标准管 蒸馏水(μL)50 样本(μL)50 氯仿(μL)50 标准品(μL)50 试剂一(μL)500 试剂二(μL)200 充分振荡 10min 后,3000rpm,离心 10min 上层溶液(μL)200 试剂三(μL)800 充分振荡 2min 后,静置 15min,于 550 nm 下测吸光值,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管。(对照管和空白管各只做一管) 三、FFA 含量计算: 1.标准曲线的绘制: 以标准溶液的浓度为 x 轴,以ΔA 标准(ΔA=A 标准管-A 空白管)为 y 轴,绘制标准曲线,得到方程 y=kx+b。将ΔA(ΔA=A 测定管-A 对照管)带入方程得到 x。 2.血清中 FFA 含量计算 FFA(μmol/L)=1000x 3.组织中 FFA 含量计算 (1)按样本蛋白浓度计算 FFA 含量(μmol/mg prot)=x×V 样总÷(Cpr×V 样总)=x÷Cpr (2)按样本鲜重计算 FFA(μmol/g 鲜重)=x×V 样总÷W V 样总:上清液总体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品鲜重,g。1000:单位换算系数,1L=1000mL。 注意事项: (1)试剂三配制应尽量晚配,可在操作到加入试剂二时,再配制试剂三。 (2)必须保证每管的震荡频率及时间一致。 (3)尽量在 30min 内完成测量,并且测完后要密封好再丢弃。 (4)因所用试剂多数为有机溶剂,同一支吸头多次吸取会造成体积不准确,建议更换吸头。 从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验技术及论文润色服务,协助客户各类实验服务及论文润色十多年,是您值得信赖的科研合作伙伴! 如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究,欢迎您与我们联系。
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