口蹄疫病毒非结构蛋白抗体 检测试剂盒使用说明书

【产品简介】

口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV） 非结构蛋白抗体检测试剂盒适用于检测猪、牛、羊的血  清，可以区分免疫动物和野毒感染动物。

本试剂盒采用阻断 ELISA 法，在酶标板条微孔上  预包被口蹄疫病毒 3ABC 抗原。在试验中，加入稀释后 的待检血清，经过温育后，若样品中含有口蹄疫病毒抗 原特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去 未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标的单抗，样本 中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合；经洗涤除 去未结合的酶结合物；在微孔中加入 TMB 底物液，经 酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加 入终止液终止反应后，用酶标仪 450nm 波长测定反应  孔中的吸光度 OD 值。

【组份】

1抗原预包被板条1/2 块6终止液15ml

2酶结合物11/22ml7阴性对照2ml

310 倍浓缩洗涤液100ml8阳性对照1ml

4显色液11/22ml9封板膜2/4 张

5说明书1 份10样本稀释液100ml

【需自备的设备及试剂】

1.     微量移液器：10µl-100µl 、100µl-1000µl。

2.     一次性移液器吸头。

3.     量筒：500ml。

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4.     96 孔板酶标仪。

5.     蒸馏水或去离子水。

6.     洗瓶或洗板机。

【样品制备】

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮， 无溶血。

【洗涤液的准备】

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇 动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 10 倍 稀释。稀释好的洗涤液可在 4℃存放一周左右。

【注意事项】

1.     试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇 匀，使用后放回 2-8℃。

2.     不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用， 使用试剂时应防止试剂污染。

3.     底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应 该注意防护。

4.     TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.     检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包 被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于 2-8℃)。

6.     所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7.     严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程 中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.     抗原包被板为一次性用品，不得重复使用。

【操作步骤】

1.     每次试验均设置阳性对照 1 孔、阴性对照 2 孔，阴 阳性对照不用稀释，直接取 100ul 加入反应孔。

2.     将待检板条按 80ul/孔加入样本稀释液；

3.     将待检血清按 20ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液 器枪头请勿混用）；

4.     盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置 22  ( ± 3℃) 过夜反应（16-18 小时）。

5.     小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓 度洗涤液每孔加250ul ，后甩去孔内液体，以上步骤重 复 6 次，最后在干净吸水纸上拍干。

6.     每孔加酶结合物 100µl ，盖上封板膜置 22  (±3℃) 温育 60 分钟。

7.     小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓 度洗涤液每孔加250ul ，后甩去孔内液体，以上步骤重 复 6 次，最后在干净吸水纸上拍干。

8.     每孔加显色液 100µl ，混匀、盖上封板膜置 22  ( ± 3℃) 避光显色 15 分钟。

9.  每孔加终止液 50 μl ，使反应终止，10 分钟内测定 结果。

【结果判定】

用酶标仪于 450nm（630nm 作参比波长）读取吸光 度 OD 值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD 值>0.6、同时阳性对照(P)阻断率>50%；

计算方法：

PI (阻断率)= 1 －（样品 OD 值÷阴性 OD 均值）x100%

阴阳性判断： 牛、羊样本

PI(阻断率)>50%则判断为阳性； PI≤50%则判断为阴性。

【有效期】

贮存方法： 2 - 8ºC 下贮存。 有效期： 12 个月。

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