阿奇霉素

快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物阿奇霉素将和微孔条上预包被的

偶联抗原竞争抗阿奇霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物阿奇霉素的含量成

负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物阿奇霉素的含量。

二、试剂盒特性

产品货号：       YJ63A\J1

灵 敏 度：       0.05ppb

孵育温度：       25℃

孵育时间：       30min～15min

样本检测下限

组   织     ······································· 0.5ppb

鸡   蛋     ······································· 0.5ppb

牛   奶     ······································· 0.5ppb

交叉反应率

阿奇霉素（Azithromycin） ···················· 100%

红霉素（Erythromycin） ···················· <1%

泰勒菌素（Tylosin） ···························· 30%

替米考星（Tilmicosin） ························ 23%

样本回收率

组   织  ·································  70%~120%

三、试剂盒组成

四、所用仪器、试剂

具备的仪器：

酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒温箱、打印机

微量移液器：单道 20～200µl、单道100～1000µl、多道30～300 µl

试      剂：氢氧化钠、甲醇

五、样本前处理步骤

样本处理前须知

（a）实验中必须使用

一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制：

配液1  提取液A

       1份20X提取液A+ 19份去离子水混合。

配液2  提取液B

       1份2X提取液B+ 1份去离子水混合。

配液3  1M  NaOH溶液

       称取4g氢氧化钠固体加去离子水定容至100ML。

配液4  10%甲醇

       1份无水甲醇+ 9份去离子水混合

样本处理：

（a）组织样本的处理方法

1、 称2±0.05g均质后的组织至50ml离心管中，加入3ml提取液A，涡旋振荡3min；

2、再加入600µl 1M  NaOH溶液和2.4ml 提取液B，涡旋振荡3min；室温4000r/min以上离心5min；

3、取50 µl上层液体用于分析。（注：离心后若有脂肪层，去除脂肪层或拨开脂肪层，取清澈液体进行分析）。

样本稀释倍数：  4倍

此方法为多合一（组合Ⅱ）处理方法，样本可合一处理。

（b）组织（鸡肉、鸭肉）、鸡蛋、牛奶样本处理方法

1、 称取均质后的新鲜样本1±0.05g于50ml离心管中，加入5ml 10%甲醇，振荡3min，室温4000r/min以上离心5min；

2、 取50 µl上清用于分析。

样本稀释倍数:  5倍

六、 酶标免疫分析程序:

测定前应须知：

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20-25℃）。

2、 使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

操作步骤：

1、 从2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、 配液：洗涤液配制

将15ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水

按照1:19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子

水），或按所需用量配制洗涤液。

4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、 加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境反应30min

6、 将孔内液体甩干，用洗涤液250µl/孔洗板4～5次，每次间隔15-～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

7、 显色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。

8、 测定：加入终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光度值与其所含阿奇霉素量成负相关。

1、粗略判定：

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.243； 0.05ppb为1.816；0.15ppb为1.415；0.45ppb为0.74；1.35ppb为0.313；4.05ppb为0.155。则样本1的浓度范围是1.35ppb～4.05ppb；样本2的浓度范围是0.15ppb～0.45ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中阿奇霉素实际浓度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光率（%）＝B×100%

B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

（2）标准曲线的绘制与计算

以标准品百分吸光率为纵坐标，以阿奇霉素标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中阿奇霉素实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

八、 注意事项

1、 室温低于25℃或试剂及标本未回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

5、 不要使用过了有效日期的试剂盒；稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值变化；不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、 不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。标准品1的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。

8、 该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

1、 储藏条件：试剂盒于2～8℃保存，不要冷冻。

2、 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。

实验技术服务：