土壤脲酶 (S-UE) 活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/48S

产品内容：

试剂一： 甲苯2mL×1  瓶，4℃保存；  (自备)

试剂二：粉剂×1  瓶，临用前加入9mL  蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保 存；

试剂三：液体19mL×1  瓶，4℃保存；

试剂四A  液：液体0.4mL×1  支，4℃保存；

试剂四B  液：液体1.6mL×1  瓶，4℃保存；临用前将A  液倒入B  液中混合，待用；用不完的试 剂4℃保存一周；

试剂五：液体 2mL×1  瓶，4℃保存；

标准品：液体 1mL×1 支，1mg/mL 氮标准液。

产品说明：

S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、

全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水 解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96  孔板、研钵、冰、甲苯 (不允许快递) 和蒸馏水。

操作步骤：

a.    培养

b.    将培养结束的上清液稀释10 倍 (取0. 1mL  上清液，加入0.9mL  蒸馏水) 。若最终计算得到的 ΔA仍大于0.5继续稀释。

c.     标准品的准备：吸取适量的标准溶液，稀释至10 、8 、6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/mL。

d.    测氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列试剂)

混匀，于 630nm 处，蒸馏水调零，读吸光值 A ，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一 个对照管。标准曲线的建立：根据标准管的浓度 (y) 和吸光度 ( x,减去浓度为 0 的空白管) ，做标 准曲线。

脲酶活力计算

根据标准曲线，将ΔA带入公式 (x ) 计算测定中样品的浓度 (μg/mL) y值。 单位的定义：每天每g土样中产生1μgNH3-N定义为一个酶活力单位。

脲酶活力 (U/g  土样) ＝y×10×V反总÷W÷T=60×y

10：稀释倍数；T ：反应时间，1d；V反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，0.05g。

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