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细胞因子在体内具有重要的病理作用
点击次数:638 更新时间:2022-11-08
    细胞因子在体内具有重要的病理作用,在感染、炎症、自身免疫病、免疫缺陷疾病等状态下,部分细胞因子会明显变化,根据这些指标可以判断机体的免疫功能。血清、血浆或组织液中细胞因子检测可以对疾病诊断和治疗做出相应评价,具有重要的应用价值。广泛应用于细胞生物学、免疫学以及肿瘤学等领域的流式细胞术是细胞因子检测的一种方法。
  CBA(cytometric bead array)法是新发展起来的利用流式细胞术测定细胞因子的新方法,该方法直接检测分泌到细胞外的处于游离状态的细胞因子。流式细胞术不能直接检测细胞因子,CBA技术利用人工合成的微球(如直径为7.5µm的聚苯乙烯微球)代替细胞,在该做球上包被细胞因子抗体,当待测样品中含有相应的细胞因子时,人工微球上的抗体能够与细胞因子结合,然后再加入PE偶联的抗细胞因子抗体,该PE偶联抗体就可以与微球上结合的细胞因子结合,形成“三明治夹心”结构。其基本原理与ELISA法检测细胞因子具有相似之处,只是ELISA法利用的是酶系统,通过使底物显色,计算颜色的深浅来定量细胞因子,而CBA能利用的是荧光系统,通过激发PE荧光素,分析荧光信号的强弱来定量细胞因子。
  CBA稳定性好、可重复性高,能避免酶联免疫放大技术使信号失真导致的假阳性。
  流式细胞术检测用于细胞因子检测是一种相对快速、重复性好并能准确定量的方法。但由于胞内分析步骤复杂,涉及变异因素多,可能会出现结果不稳定,较难重复等问题。
  如在检测血清时,由于血清成分复杂,细胞因子含量差距大,实验中经常会出现分群不明显、微球聚集、浓度太低等现象,对实验结果造成很大影响。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果没有充分涡旋,容易沉淀聚集,细胞因子不能充分跟微球结合,导致多群甚至聚集现象发生,检测结果将是无效的。需要从制备混合微球开始到加入实验管,直到上机检测前每一步都必须充分涡旋,以避免微球发生聚集。

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