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人胆管癌细胞(HuCCT1)细胞培养说明书
点击次数:3275 更新时间:2018-08-17

胆管癌细胞(HuCCT1)

货号:HICL-041

 

细胞特性

1) 来源:胆管癌

2) 形态上皮细胞贴壁生长

3) 含量:>1x106 个/mL

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

 

细胞接受后的处理:

1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h

3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的*培养基。

4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的*培养基。

5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

 

细胞用途:仅供科研使用。

                       

本公司细胞培养操作规程,供参考

一.培养基培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液90%血清10%DMSO现用液氮储存。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化

3. 轻轻打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。

4. 移入到事先准备好的含有5ml培养基T-25培养瓶中或含有14ml培养基T-75培养瓶中培养

3)细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数消化方法按照细胞传代方法的1-3骤进行,后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106细胞冻存。

 

注意事项:

1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 

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