更新时间: | 2022-10-19 |
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厂商性质: | 生产厂家 |
RT-PCR技术服务1、引物设计合成(人、大鼠、小鼠、兔等)2、基因表达水平检测、内参检测3、SNP检测服务4、甲基化检测服务5、测序技术服务6、芯片检测(全基因、MicroRNA)7、染色体分析
反转录PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外,RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性,还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法,可满足客户不同的实验要求。
样品要求:提供的样品要新鲜并尽可能多,不推荐提供RNA样品,或者提供cDNA,并尽可能详细的提供背景资料(基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等)。
RT-PCR技术服务?基本步骤:
● 模板制备:见RNA提取技术服务。
● 引物设计
客户提供上、下游引物,或者我公司提供免费的引物设计及合成(包括RT-PCR半定量检测中的内参引物)。
● 反转录
(1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。
试剂名称 | 使用量 |
模板RNA | 2μg |
Oligo(dT)12-18 Primer(50μM) | 2.5μl |
(2)70℃保温5分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
(3)离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于Microtube管底部。
(4)在上述Microtube管中配制下列反转录反应液。
试剂名称 | 使用量 |
上述模板RNA/引物变性溶液 | |
5×M-MLV Buffer | 5μl |
dNTP Mixture(各10 mM) | 1.25μl |
RNase Inhibitor(40 U/μl ) | 25U |
M-MLV(200 U/μl ) | 200U |
RNase free dH2O | up to 25μl |
42℃保温1小时。
(5)70℃保温15分钟后冰上冷却,得到cDNA溶液。
若需要表达,参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析,接着以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR扩增目的基因及看家基因,产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。
RNA模板的制备需另收费(见RNA提取服务)以上为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时,同一材料的多个目的基因的价格=1个目的基因价格×目的基因个数。
提供结果
完整的实验操作步骤、电泳图、定量分析结果等。
RT-PCR技术服务参照: