| 更新时间： | 2020-12-11 |
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| 厂商性质： | 生产厂家 |
我司生产的狗狂犬病抗体检测试剂盒采用酶联免疫方法（ELISA）检测犬血清中的特异性抗狂犬病毒抗体，用于犬只免疫后抗体监测。
犬狂犬病毒抗体检测试剂盒
使用说明书
【介绍】
狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗体检测试剂盒用于检测猫、犬等动物血清中的狂犬病毒抗体，用于评估狂犬病毒疫苗免疫状况。
本试剂盒采用阻断ELISA法，在酶标板条微孔上预包被狂犬病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有狂犬病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标的抗狂犬病毒单抗，样本中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合；经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
【组份】
1 | 抗原预包被板条 | 1/2块 | 7 | 终止液 | 11ml |
2 | 酶结合物 | 11/22ml | 8 | 阴性对照 | 1/2ml |
3 | 10倍浓缩洗涤液 | 100ml | 9 | 阳性对照 | 0.5/1ml |
4 | 样本稀释液 | 50ml | 10 | 封板膜 | 2/4张 |
5 | 显色液 | 11/22ml |
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6 | 说明书 | 1份 |
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【需自备的设备及试剂】
- 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
- 一次性移液器吸头。
- 量筒：500ml。
- 96孔板酶标仪。
- 蒸馏水或去离子水。
- 洗瓶或洗板机。
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液的准备】
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
【注意事项】
- 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
- 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
- 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
- TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
- 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
- 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
- 严格遵守操作说明可以获得H的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精q。
- 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用；
【操作步骤】
- 每次试验均设置空白孔1孔、阳性对照1孔、阴性对照2孔，阴性对照、阳性对照直接取100ul/孔加入孔内；
- 将样品稀释液按90ul/孔加入到微孔反应板内，之后将待检样品血清按10ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液器枪头请勿混用）；
- 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
- 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，后在干净吸水纸上拍干。
- 除空白对照孔外，每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
- 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同4。切记后在干净吸水纸上拍干。
- 每孔加显色液100µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
- 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
【结果判定】
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。
试验成立的条件是：
N值>0.5、同时阳性对照(P)阻断率>50%；
计算方法：
PI (阻断率)= 1 —（样品OD值 / 阴性OD均值）
阴阳性判断：
PI(阻断率)>40%则判断为阳性；
PI≤40%则判断为阴性。
注：（PI=40%相当于抗体滴定度0.5IU/ml)
【有效期】
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。
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