更新时间: | 2019-04-18 |
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厂商性质: | 生产厂家 |
总抗氧化能力试剂盒测定原理在酸性环境下,物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。
货号:YC2306 规格:50管/48样
总抗氧化能力(Total antioxidant capacity ,T-AOC)
试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液
及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理
在酸性环境下,物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体 60mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体 50mL×1 瓶,避光保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,避光保存。
样品的制备
(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超30 d)后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
操作步骤
混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合,使用前预温至 37℃ 。
| 空白管 | 测定管 |
混合液(μL) | 900 | 900 |
样品(μL) |
| 30 |
双蒸水(μL) | 120 | 90 |
充分混匀,反应10min,双蒸水调零,1mL玻璃比色皿,测定593nm处吸光值,△A= A测定 -A空白 |
注意:空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算
1. 定义:样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(△A)所需的标准液离子浓度表示。
标准曲线为 y=0.6308 x +0.1291,R2=0.9989
2. 计算公式:
(1)按蛋白浓度计算
总抗氧化能力(U/mg prot)=1÷0.6308×(△ A-0.1291)× V 反总÷(V 样× Cpr)
=53.9×(△ A-0.1291)÷ Cpr
(2)按样品质量计算
总抗氧化能力(U/g)=1÷0.6308×(△ A-0.1291)× V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=53.9×(△ A-0.1291)÷ W
(3)按细胞数量计算
总抗氧化能力(U/104 cell)=1÷0.6308×(△A-0.1291)×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 53.9×(△A-0.1291)÷ 细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
总抗氧化能力(U/mL)=1÷0.6308×(△A-0.1291)× V 反总÷V 样
=53.9×(△A-0.1291)÷ Cpr
V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,1.02mL;V 样:反应中样品体积,
0.03mL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL
注意事项
1. 试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并
戴乳胶手套操作。
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生
干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反
应的还原剂。
4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外,需把样品适当稀释或浓缩后再进行测
定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。
糖原含量说明书
ca ++ mg ++ - atp 酶活性测定说明书